[미생물] 대장균군 시험 보고서 (누구나 다 할 수 있습니다)

왜 하는 가?

대장균군이 분변오염지표균임을 이해하고 유당배지를 이용한 대장균군 정성시험, 추정시험, 확정시험, 완전시험 3단계의 시험법을 익힌다.

처음이 정말 중요한 정성시험

1. LB배지를 2.6g과 D.W100ml를 준비하고 배지의 무게를 측정한 뒤 핫플레이트 스틸러로 교반을 한다.

2. 교반이10ML씩 담고 듀란관을 넣어준다(듀란관이 가스가 발생하는지 안 하는지를 알기 위해서)

3. 시험관에 호일을 감싸고 오토클레이브(autoclave)넣은 뒤 멸균을 한다.

4. 식염수(NaCl)을 4.25g, 500ml의 D.W를 넣고 메디아병에 담아 뚜껑을 닫고 흔들어서 섞어준다.

5. 알코올로 메디아 병을 소독 후 클린벤치로 가져와 시료와 멸균백을 저울에 올려 시료를 20g을 측정한다.

6. 측정 후 시료 무게와 합해서 식염수를20.5g를 넣어주고 스토마커로 가져와 균질화를 해준다.

7.균질화가 끝나면 클린벤치로 가져와서 접종을 한다. 마이크로 피펫 1000ppm으로 1ml를 채취하여 시험관에 접종을 하고 배양기에 넣어주면 된다.

이름이 특이한 백금이를 사용하는 유당배지법

백금이는 미생물을 배양을 할 때 미세하게 사용하는 도구이다. 획선평판법을 많이 사용을 한다.

또한 종류는 보통 금속 와이어를 많이 쓰며 일회용인 플라스틱으로 된 것도 많이 사용한다.

1. BGLB배지를 10g을 측정하고 증류수 100ml를 준비하여 비커에 담아 교반을 한다.

2. 시험관에 완성된 배지를 담아 듀란관 튜브에 공기가 들어가지 않도록 뒤집어 넣는다 그리고 오토클레이브에 121도 15분간 멸균을 한다.

3. 전에 배양을 해둔 배양액에서 균을 백금이로 채취하여 새롭게 만든 배지에 접종을 한다.

마지막방법인 확정시험

1. BGLB배지를 저울로7g을 측정하고 100ml의 D.W를 메스실린더에 채워준다.

2. 채운 다음 비커에 BGLB배지와 증류수를 담아주고 핫플레이트 스틸러로 교반을 한다.

3. 교반을 다 하면 메디아 병에 배지를 담아 호일로 잘 감싸서 오토클레이브에 넣어주고 121도~ 15분간 멸균을 한 뒤 클린벤치로 가져와 페트리 디쉬에 BGLB배지를 부어 주고 시험관에 담겨 있는 시료를 백금이로 사용해 접종을 한 뒤 접종한 배지를 배양기에 넣어준다.

대장균은 장 이외의 부위 쪽으로 들어가게 되면 방광염,신우염,복막염,패혈증 등등 위험한 균이다. 또한 아기~성인까지 전염성 설사를 일으키는 상황이 있어서 이를 병원성대장균이라 한다.

대장균 틀에 대장균군이 있는 것이다. 대장균군은 장내 세균이고 그람음성 및 통성 혐기성이다. 포자가 형성하지 않으며 35도에서 48시간(2일) 배양했을 때 유당을 분해하여 가스가 나오는데 이를 대장균군 자연에서도 발견되니 음식이나 먹는 물을 조심해야 한다. 식수에서 검출되는 경우 약수터나 그런 곳에서 많이 발생한다. 또한 아주 유명한 병 장티푸스나 콜레라 같은 병들은 대부분 변이 오염된 물를 섭취 해서 전염이 될 때 예를 들어 사람들이 노로바이러스 조심해라 조심해라 하는지 알겠다. 근데 노로바이러스는 위장염 바이러스이다.

이건 대장균군과 관련 없는 내용이지만 참고!

스트리킹 도말법

단일 콜로니 배양

1. na배지:5.75g+d.w250ml 제조하고 HOT plate stirrer에 잘 돌려준다.

2. 멸균병에 옮겨주고 뚜껑에 호일을 감싼다.

3. autoclave에 121도 / 15min 멸균 한다.

4. 멸균이 끝나면 clean bench로 옮겨서 배지를 식힌 뒤 petri dish에 부어주고 식을 때까지 기다린다.

5. 단일 콜로니의 무슨 세균으로 할 건지 정하고 a,b,ca, b, c균으로 정하고 petri dish에 스트리 킹 그림을 그려준다.

6. 스트리킹 그림을 다 그리면 배양기에 넣어준다.

결과: 단일 콜로니 생성이 돼서 실험은 성공이라고 판단됨..

고찰: 수행평가를 봤는데 스트리킹 그림을 너무 못 그려서 엄청난 연습이 필요할 거 같다 그리고 균이 조금밖에 없었는데 백금이를 멸균 할 때 잘 안 식혀서 균이 죽은 것 같다.